在免疫学实验中,抗体的选择是一项基本功,而“同型对照”往往是最容易被忽略的一环。它并非锦上添花,而是验证实验特异性的保底方案。如果你也曾在流式细胞术、免疫组化等实验中苦恼于背景信号高、假阳性泛滥,或许问题就出在你没选好同型对照。
同型对照抗体(Isotype Control)是与一抗具有相同“外观参数”(即亚型、物种、标签等),但不识别任何目标抗原的抗体。它的核心作用是帮助你判断:
“当前信号,是靶标的存在,还是系统的噪音?”
你做的是流式实验,想检测T细胞表面的CD4蛋白,用的是“小鼠IgG1抗体+PE荧光”。但你发现,不管有没有CD4,这些细胞都在发光,让你怀疑:是不是抗体粘错地方了?
这时,你就需要拿出“假装也一样的兄弟”——一个小鼠IgG1同型对照抗体(带PE荧光,但不识别任何蛋白)。
Fig.1. 同型对照抗体排除非特异性结合产生的背景荧光。使用同型对照抗体对小鼠脾脏单细胞悬液进行染色并进行流式分析。
实验类型 | 是否推荐使用 | 原因说明 |
---|---|---|
流式细胞术(FCM) | 强烈推荐 | 排除Fc结合、设定阳性阈值 |
免疫组化(IHC) | 推荐 | 评估组织背景染色,排查非特异结合 |
免疫荧光(IF) | 推荐 | 区分自发荧光和真实靶点信号 |
Western Blot | 一般不使用 | 可通过分子量判断目标带,封闭剂控制非特异信号 |
选择对照不是随便抓一支“同型抗体”就行,必须确保以下四项完全一致:
项目 | 匹配要求 |
---|---|
抗体亚型 | 与一抗一致(如 Mouse IgG1) |
物种来源 | 与一抗来源相同(Mouse / Rabbit) |
标记方式 | 一致(如 FITC / PE / APC / PerCP ) |
抗体纯化方式 | 确保高纯度,避免背景干扰 |
提示:不能只看“同型”,而忽略偶联和来源,否则可能“对照”出了假信号。
为满足流式细胞术、免疫组化、免疫荧光等实验需求,abinScience提供高纯度同型对照抗体系列,产品特点如下:
特点 | 说明 |
---|---|
高纯度 | 经严格纯化,减少非特异背景信号 |
多亚型支持 | 覆盖Mouse IgG1、Rabbit IgG、Rat IgG2a/2b等多种亚型 |
多样标记 | 提供FITC、PE、APC、HRP、Biotin等多种标记形式 |
适用实验 | 兼容FCM、IHC、IF等多种免疫学实验 |
常用产品推荐(更多产品请访问官网):
物种 | 货号 | 产品名称 | 应用 |
---|---|---|---|
Human | HV080507 | Human IgG1 Isotype Control Antibody (13R4) | FCM, In vivo Control |
HP298107 | Human IgG4 (S228P) Isotype Control Antibody (SAA0184) | FCM, In vivo Control | |
HV496307 | Human IgM Isotype Control Antibody (SAA0185) | FCM, In vivo Control | |
Mouse | MV080307 | Mouse IgG1 Isotype Control Antibody (IS5-21F5) | FCM, In vivo Control |
MF533507 | Mouse IgG2a, kappa Isotype Control Antibody (MOPC-173) | FCM, In vivo Control | |
MF974307 | Mouse IgG2b Isotype Control Antibody (IS6-11E5.11) | FCM, In vivo Control | |
MV496407 | Mouse IgM Isotype Control Antibody (GC323) | FCM, In vivo Control | |
Rat | RV080407 | Rat IgG1, kappa Isotype Control Antibody (RTK2071) | FCM, In vivo Control |
RF533407 | Rat IgG2a Isotype Control Antibody (2A3) | FCM, In vivo Control | |
RF974107 | Rat IgG2b Isotype Control Antibody (LTF-2) | FCM, In vivo Control |
所有产品提供一对一选型支持,适配主流免疫学实验。
你真的知道WB或IF中,一抗和二抗该稀释多少倍吗?一不小心太浓或太稀,结果就天差地别。下一期我们将手把手教你:不同平台、不同抗体如何配比更高效,用更少的抗体,跑出更稳的结果!
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