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抗体太烧脑一篇一拆解 第9期|一文讲清实验中不可忽视的“同型对照抗体”

发布日期: 2025-07-02 访问次数: 37

引言

在免疫学实验中,抗体的选择是一项基本功,而“同型对照”往往是最容易被忽略的一环。它并非锦上添花,而是验证实验特异性的保底方案。如果你也曾在流式细胞术、免疫组化等实验中苦恼于背景信号高、假阳性泛滥,或许问题就出在你没选好同型对照。

1. 什么是同型对照抗体?

同型对照抗体(Isotype Control)是与一抗具有相同“外观参数”(即亚型、物种、标签等),但不识别任何目标抗原的抗体。它的核心作用是帮助你判断:

“当前信号,是靶标的存在,还是系统的噪音?”

简单举个例子:

你做的是流式实验,想检测T细胞表面的CD4蛋白,用的是“小鼠IgG1抗体+PE荧光”。但你发现,不管有没有CD4,这些细胞都在发光,让你怀疑:是不是抗体粘错地方了?

这时,你就需要拿出“假装也一样的兄弟”——一个小鼠IgG1同型对照抗体(带PE荧光,但不识别任何蛋白)。

  • 如果它不发光:说明你看到的信号是真的,来自CD4。
  • 如果它也发光了:说明你的一抗可能是乱绑定的,数据就不可靠了。

Fig.1. 同型对照抗体排除非特异性结合产生的背景荧光。使用同型对照抗体对小鼠脾脏单细胞悬液进行染色并进行流式分析。

2. 哪些实验需要用到同型对照?

实验类型 是否推荐使用 原因说明
流式细胞术(FCM) 强烈推荐 排除Fc结合、设定阳性阈值
免疫组化(IHC) 推荐 评估组织背景染色,排查非特异结合
免疫荧光(IF) 推荐 区分自发荧光和真实靶点信号
Western Blot 一般不使用 可通过分子量判断目标带,封闭剂控制非特异信号

3. 同型对照该怎么选?

选择对照不是随便抓一支“同型抗体”就行,必须确保以下四项完全一致:

项目 匹配要求
抗体亚型 与一抗一致(如 Mouse IgG1)
物种来源 与一抗来源相同(Mouse / Rabbit)
标记方式 一致(如 FITC / PE / APC / PerCP )
抗体纯化方式 确保高纯度,避免背景干扰

提示:不能只看“同型”,而忽略偶联和来源,否则可能“对照”出了假信号。

4. 推荐产品 | abinScience 同型对照抗体系列

为满足流式细胞术、免疫组化、免疫荧光等实验需求,abinScience提供高纯度同型对照抗体系列,产品特点如下:

特点 说明
高纯度 经严格纯化,减少非特异背景信号
多亚型支持 覆盖Mouse IgG1、Rabbit IgG、Rat IgG2a/2b等多种亚型
多样标记 提供FITC、PE、APC、HRP、Biotin等多种标记形式
适用实验 兼容FCM、IHC、IF等多种免疫学实验

常用产品推荐(更多产品请访问官网):

物种 货号 产品名称 应用
Human HV080507 Human IgG1 Isotype Control Antibody (13R4) FCM, In vivo Control
HP298107 Human IgG4 (S228P) Isotype Control Antibody (SAA0184) FCM, In vivo Control
HV496307 Human IgM Isotype Control Antibody (SAA0185) FCM, In vivo Control
Mouse MV080307 Mouse IgG1 Isotype Control Antibody (IS5-21F5) FCM, In vivo Control
MF533507 Mouse IgG2a, kappa Isotype Control Antibody (MOPC-173) FCM, In vivo Control
MF974307 Mouse IgG2b Isotype Control Antibody (IS6-11E5.11) FCM, In vivo Control
MV496407 Mouse IgM Isotype Control Antibody (GC323) FCM, In vivo Control
Rat RV080407 Rat IgG1, kappa Isotype Control Antibody (RTK2071) FCM, In vivo Control
RF533407 Rat IgG2a Isotype Control Antibody (2A3) FCM, In vivo Control
RF974107 Rat IgG2b Isotype Control Antibody (LTF-2) FCM, In vivo Control

所有产品提供一对一选型支持,适配主流免疫学实验。

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你真的知道WB或IF中,一抗和二抗该稀释多少倍吗?一不小心太浓或太稀,结果就天差地别。下一期我们将手把手教你:不同平台、不同抗体如何配比更高效,用更少的抗体,跑出更稳的结果!

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