抗体太烧脑一篇一拆解 第10期｜抗体浓度配比咋选？用得刚刚好，实验才靠谱！

引言

很多人做 WB、IF、IHC 时，最关注的是抗体好不好、条带清不清、背景高不高，但往往忽略了一个基本问题——抗体用多少才合适？一抗配太少，信号弱得可怜；二抗配太多，背景满屏“雪花”；浓度不合理，实验白做不说，还浪费了贵贵的抗体。今天我们就来系统聊一聊：不同平台下，抗体浓度怎么配，效果更稳定，数据也更可信。

1. 常见误区，你踩过几个？

浓度太稀，信号弱到几乎看不到

Western Blot 做完才发现，目标蛋白的位置空空如也？很多时候并不是你跑错了，而是一抗浓度压根不够。

浓度太浓，背景一片模糊

膜上一堆“信号”，但分不清哪条才是靶点？不是设备问题，是你浓度拉得太猛了。

二抗随便用，放多少凭感觉

很多人只关心一抗浓度，二抗直接按“印象”来，结果放完增强剂还没加，背景就已经满屏了。

提示：不同平台对抗体浓度的容忍度差异很大，千万不要拿 WB 的配比套用到 IF 或 FCM 上。所谓“通用浓度”其实根本不存在！

2. 不同实验平台该怎么配浓度？

注意：浓度建议只是经验值，具体还需结合抗体说明书、标签类型、样本背景逐步优化。

Fig.1.不同抗体浓度优化对比图（图源cytivalifesciences.com）

3. 浓度优化的四个关键细节

梯度浓度测试

不确定稀释比例？就选 2～3 个梯度浓度跑一次（如 WB 可用 1:500、1:1000、1:2000），很快就能看出哪组最合适。

先定一抗，再调二抗

很多信号问题表面看是“检测不出来”，其实一抗本身浓度就不到位。先确认一抗有效，再调二抗浓度更稳妥。

标签类型也影响浓度选择

HRP、FITC、PE、AP 等标签信号强度不同，对浓度的“容忍度”也差异明显。别只看说明书写个 1:1000，就盲目照搬。

不是浓度越高越好

有些人以为浓一点能看到信号，但实际上可能引发非特异性结合，反而模糊了真正的条带或荧光点。实验需要“刚刚好”，不是“越多越妙”。

Fig.2.抗体浓度梯度

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5. 写在最后

抗体浓度选得准，实验就成功了一半。别再靠“感觉”来稀释抗体了——科学地设定浓度，不但省抗体、省时间，还能显著提高实验的稳定性和可重复性。

这一期作为【抗体太烧脑，一期一拆解】系列的终结篇，我们希望用最实用的方式，把实验操作中的关键点“拆开讲清楚”。不卖关子、不绕弯子，帮你节省每一滴抗体，每一小时实验时间。

6. 下一期预告 | 免疫实验全拆解系列：WB 实验你做对了吗？

我们将开启全新的【免疫实验全拆解系列】，首期聚焦最基础却问题频出的 Western Blot。你真的知道为什么条带总偏移？背景总太高？转膜时间该多长？曝光该怎么调？

敬请期待《免疫实验全拆解系列：WB 实验你做对了吗？》上线！