Lin⁻ 标志物：它的真正意义是什么？

Lin⁻（Lineage-negative，谱系阴性)是流式细胞术中重要的标识，主要用于检测和富集未分化的细胞群体，这些细胞不表达传统的免疫谱系标志物（如T细胞、B细胞、NK细胞等），通常被认为是前体细胞或具有特殊功能的免疫调节细胞。

Lin⁻ 筛选的原理与目的
Lin⁻筛选的核心思路在于利用一组针对成熟免疫细胞的抗体组合（Lineage Cocktail），通过流式细胞仪对目标样本进行筛查。通过排除那些表达T、B、NK细胞和其他已知谱系标志物的成熟免疫细胞群体，我们可以将未分化的细胞群体分离出来。换句话说，Lin⁻是一个有效的过滤策略，帮助研究者从复杂的细胞池中找出真正需要的“候选细胞”。这种方法广泛应用于免疫学、肿瘤微环境研究以及干细胞生物学研究。

Lin⁻细胞的特性
Lin⁻细胞的一个显著特性是，它们缺乏成熟免疫细胞的表面标志物。这意味着，这类细胞群体中包含了许多尚未分化的前体细胞、干细胞，以及一些对免疫调节具有重要作用的特殊细胞，例如MDSCs（髓系来源的抑制性细胞）。研究这些细胞的行为和功能有助于揭示免疫抑制机制、肿瘤进展机制及干细胞发育过程。

常用的谱系标志物
Lin⁻筛选所采用的谱系抗体组合（Lineage Cocktail）通常包含多种抗体，靶向以下几类常见谱系标志物：

• T细胞：CD3、CD4、CD8
• B细胞：CD19、CD20
• NK细胞：CD56、CD16
• 单核细胞/巨噬细胞：CD14
• 粒细胞：CD66b

通过将这些抗体混合并与样本细胞孵育，可以在流式细胞仪中检测出哪些细胞是谱系阳性（Lin⁺）。随后，流式细胞分析软件能够自动排除这些Lin⁺细胞，剩下的即是我们所关注的Lin⁻细胞群体。

Lin⁻细胞的应用领域

• 肿瘤微环境研究：
  肿瘤微环境中的Lin⁻细胞往往包括大量的MDSCs，这些细胞通过抑制T细胞、NK细胞等免疫效应细胞的活性，从而促进肿瘤的免疫逃逸与生长。研究Lin⁻细胞群体的动态变化，可以帮助我们更好地理解肿瘤免疫调控机制，并为开发新型免疫疗法提供依据。
• 造血干细胞研究：
  在造血干细胞的研究中，Lin⁻标志物能够帮助筛选和富集那些未分化的、真正的造血干细胞（HSCs）。通过这种策略，可以提高干细胞移植的成功率，进一步推动造血干细胞相关疾病的治疗研究。
• 免疫抑制细胞功能研究：
  Lin⁻细胞群体不仅包含造血干细胞，还包括其他类型的免疫调节细胞，例如MDSCs或早期未分化的调控T细胞前体。研究这些Lin⁻细胞的功能，可以揭示新的免疫抑制机制，为治疗免疫相关疾病（如自身免疫病、炎症性疾病等）提供新的思路。

Lin⁻实验技术要点
作为流式细胞检测专员，在设计和执行Lin⁻筛选实验时，需要注意以下几点：

• 确保使用合适的Lineage Cocktail，并验证抗体的质量和特异性。
• 优化抗体孵育时间和温度，以获得最佳染色效果。
• 在流式细胞仪中设置好适当的补偿和门限，确保正确识别Lin⁺和Lin⁻细胞群。
• 在分析软件中，仔细查看并确认数据的准确性，避免误将目标细胞归为背景或非目标群体。

总的来说，Lin⁻筛选不仅是一种技术手段，更是一个重要的策略，为深入探讨细胞群体特性、揭示疾病机制提供了可靠的工具。

参考文献：

Vaughan A E, Brumwell A N, Xi Y, et al. Lineage-negative progenitors mobilize to regenerate lung epithelium after major injury[J]. Nature, 2015, 517(7536): 621-625.