第5期｜蛋白实验从源头抓起：样本裂解与定量指南

引言

在蛋白表达研究中，无论是Western blot、免疫沉淀（IP）还是质谱分析，样本处理都是影响结果准确性的第一道关口。从裂解方法的选择、抑制剂的添加，到后续的蛋白定量手段，每一步都需要精准把控，才能为后续的信号检测与数据解读打下坚实基础。

一、为什么蛋白裂解这么重要？

不同细胞或组织的结构差异显著，蛋白质定位也各不相同。细胞膜、核膜、胞器膜等结构对蛋白提取形成天然屏障，若裂解方法选择不当，不仅提取效率低，蛋白降解与变性风险也大大增加。特别是在研究膜蛋白、磷酸化蛋白或瞬时信号激活等课题时，对样本完整性的要求更为严苛。

Fig.1.样本裂解过程示意图(doi.org/10.3390/mi8030083)

二、经典RIPA裂解液配方与操作建议

RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液因其兼具裂解力与蛋白保留能力，在总蛋白提取场景中应用广泛。适用于细胞裂解、组织匀浆样本的常规Western blot、免疫共沉淀（IP）及部分功能性蛋白分析。

✅ 常规RIPA裂解液配方

使用前需现配添加以下抑制剂以提升裂解效果和蛋白稳定性：

• 1 mM PMSF（抑制丝氨酸蛋白酶）
• 1 mM EDTA（螯合金属酶活性）
• 蛋白酶抑制剂混合物（如E64、pepstatin A）
• 磷酸酶抑制剂：NaF、Na₃VO₄（如需保护磷酸化位点）

Fig.2.RIPA裂解液组分图

三、裂解操作注意事项

四、蛋白定量方法简述：BCA vs Bradford

在蛋白裂解完成后，准确定量是保证上样一致性与后续分析可靠性的关键一步。以下为常用蛋白浓度检测方法对比：

Fig.3.蛋白定量方法选择图(10.1039/C4AN01819B)

五、典型错误示例与优化建议

Fig.4.裂解失败案例

六、结语｜把控好第一步，才能让蛋白表达结果更可信

蛋白表达实验成败的第一步，始于样本裂解和定量环节。标准化的裂解流程与合理的Buffer选择，不仅能提升目标蛋白保留率，也为后续抗体检测与数据分析奠定基础。建议实验者根据研究目的灵活调整裂解策略，结合定量方法双重把关，共同守好蛋白分析的“入口关”。abinScience提供高品质裂解试剂与抗体产品，支持您的实验需求。

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参考文献

• Thermo Fisher Scientific. (2025). *Protein Extraction and Quantification Guide*. https://www.thermofisher.com
• Wild, D. (Ed.). (1996). *Immunoassays: A practical approach*. Oxford University Press.

下一期预告｜单抗、多抗、重组抗体如何选？

同一个靶点，为何有这么多种抗体？选哪种才最稳妥？下一期我们将深入解析单克隆抗体（monoclonal antibody）、多克隆抗体（polyclonal antibody）与重组抗体（recombinant antibody）三者在特异性、批间一致性、靶点识别能力、适用实验场景等方面的差异。

此外，我们也将分享各类抗体在Western blot、IHC、IF、流式等实验中的实战表现，以及如何根据实验目的与预算灵活选择，避免掉坑。

敬请关注——
《第6期｜抗体怎么选？单抗、多抗、重组抗体一篇讲透》