抗体实验中，大家往往更关注一抗的选择，而忽视了二抗的正确搭配。但其实，二抗是否选对，直接影响信号强弱与背景水平。今天我们就来系统梳理不同免疫学实验中常见的二抗选择原则，并特别解析IP-WB中“二抗乱象”背后的关键逻辑。abinscience提供高品质二抗产品，支持您的实验需求。
Fig.1.抗体实验中一抗与二抗的搭配示意图
| 实验类型 | 常用二抗选择 | 注意事项 |
|---|---|---|
| Western Blot (WB) | HRP/近红外标记二抗（Goat anti-X IgG） | 确保与一抗种属匹配；WB多选HRP/IRDye标记，避免一抗与二抗同种属且无交叉吸附 |
| 免疫荧光（IF） | Alexa Fluor/FITC标记二抗 | 避免荧光共谱；优选交叉吸附型二抗以减少背景 |
| 免疫组化（IHC） | Biotin/HRP/AP标记二抗 | 与显色系统兼容（DAB/NBT）；组织特异性背景需考虑交叉吸附 |
| 流式细胞术（FCM） | PE/APC/FITC标记二抗 | 通道荧光需兼容，避免交叉信号干扰；优选F(ab')₂去Fc段结构 |
| ELISA | Biotin/HRP/AP标记二抗 | 注重酶标敏感性；比色用HRP/AP，荧光用荧光素酶 |
| 免疫沉淀+WB（IP-WB） | 经特殊去异源交叉吸附的二抗 | 重叠宿主组合时需避免识别IP抗体，详见下节 |
Fig.2.二抗选择解析
交叉吸附（Cross-adsorbed）是指二抗经过特殊处理，去除了会与非目标物种IgG发生非特异性结合的部分。
Fig.3.交叉吸附（Cross-Adsorption or Pre-Adsorption）二抗工作原理图
免疫沉淀（IP）后接WB检测的组合，最容易踩坑的一项，就是二抗“识别了IP用的一抗”，导致假阳性或重影带。以下是不同组合推荐用法整理（建议收藏）：
| 一抗类型 | WB检测二抗推荐 | 备注说明 |
|---|---|---|
| 小鼠单抗 | HRP-标记Protein A 或交叉吸附小鼠IgG二抗 | HRP-Protein A可识别IgG Fc段，避免二抗干扰 |
| 小鼠多抗 | HRP-标记兔IgG二抗 | 确保样本不含兔IgG背景 |
| 兔多抗 | HRP-标记交叉吸附兔IgG二抗 | 减少与样本中内源性兔IgG交叉反应 |
| 兔单抗 | 同上（优选去除人/鼠/羊交叉二抗） | 特别推荐abinscience、CST、Jackson等品牌交叉吸附二抗 |
| 使用Protein A或G做IP | HRP-抗兔/小鼠IgG二抗（根据一抗） | 二抗应避免识别结合到beads上的Protein A残留抗体 |
Fig.4.IP-WB中二抗选择与假阳性对比图
在本期内容中，我们将深入探讨中和抗体的核心作用，聚焦其在病毒抑制、免疫治疗及疾病研究中的应用前景。
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