一、实验前材料准备
① 手术器械：包括眼科剪、眼科镊等。
② 培养皿：一次性塑料培养皿。
③ 细胞筛：70 μm或200目滤网用于过滤细胞团块，保证得到单细胞悬液。
④ 离心管：15 mL或50 mL的离心管，用于收集和离心细胞。
⑤ PBS 或培养基：用于清洗细胞。
备注：如果细胞后续用于培养请将材料消毒，保证无菌。
二、小鼠淋巴结获取
颈椎脱臼法处死小鼠，75%乙醇浸泡5 min，取出小鼠置于操作台上，从底端四肢小心剪开小鼠整个腹部皮肤，暴露出小鼠腹膜。小鼠淋巴分布位置如图1所示。根据需要在对应位置获取所需淋巴结，其中颈浅部、腋窝部位、腹股沟部位的淋巴结比较好找。
图1. 小鼠淋巴结分布位置
小鼠淋巴结数目和长径
1. 淋巴结数目
多数部位淋巴结只见一个淋巴结，但在颈浅部、胸内部、胃部、胰部以及肠系膜部都可见到2-3个淋巴结，偶或多至4个，其中以胸内淋巴结数目变化的情况较多。
2. 淋巴结的长径
绝大多数淋巴结的长径在2-3.5 mm，最大者为肠系膜淋巴结，其长径都在10 mm以上，最小者为颈深部，坐骨部和尾部淋巴结，长径皆等于或小于1 mm，一般正常淋巴结，其长径都不超过4 mm。
三、淋巴结单细胞悬液制备
① 将淋巴结置于在70 μm或200目滤网上，用5 mL注射器活塞/柱塞的扁平末端部分或研磨棒以温和画圆的方式研磨。
②用适量PBS/培养基冲洗滤网，收集细胞于离心管中，如悬液中仍有固体残留，可用滤网重新过滤。
③ 300-500 g离心5 min，弃上清。
④ 用PBS或培养基重悬细胞，计数，调整细胞浓度到1×107/mL。
四、注意事项
① 摘取淋巴结后，尽可能移除黏连的脂肪组织，提高淋巴结细胞的占比。
② 研磨力度尽量轻柔，避免造成过多机械性死亡的细胞。
③ 收集的细胞如需进一步培养，请注意无菌操作；如果只是做普通的流式实验，则可以不考虑无菌环境。
④ 细胞计数可以使用血细胞计数板或者自动细胞计数仪来计数细胞。
⑤ 为保持细胞活性，减缓代谢，尽量全程低温操作（在冰上或4℃环境）。
关于我们
abinScience创立于法国，专注于高质量生命科学试剂的开发与生产，立足法国斯特拉斯堡创新科技中心，以“Empowering Bioscience Discovery”为愿景。abinScience流式抗体产品覆盖常用检测指标，品类丰富，可满足多物种（Human/Mouse/Rat/Dog/Hamster/Monkey等）科研实验需求，为科研提供稳定可靠的支持，更多abinScience流式抗体信息请点击：
abinScience流式抗体
