在蛋白质研究中，Western blot（WB）、免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）等技术中，内参抗体（Loading Control）是归一化蛋白表达的基础工具。它不仅关乎实验数据的可比性和准确性，还影响结果的重复性和后续统计分析的可信度。一支合格的内参抗体，应具备稳定表达、广泛适用、条带清晰等特点，并结合实验系统与目标蛋白的特性合理选择。
| 特征 | 说明 |
|---|---|
| 表达稳定 | 在不同组织、细胞系、处理条件或周期阶段中始终维持稳定表达，不受变量影响 |
| 广泛表达 | 在多种哺乳动物来源样本中普遍表达、差异小，便于组间比较与归一化 |
| 分子量清晰 | Western中呈现特异、单一条带，便于图像量化与分析，避免背景干扰 |
| 与目标分子量间隔大小 | 内参蛋白与目标蛋白的分子量应有显著差异（建议间隔至少10-15 kDa），以避免在Western blot中信号重叠或干扰量化分析 |
内参抗体的选择应匹配实验目标、样本分区和目标蛋白分子量，以下为常见推荐：
Fig.1.不同细胞结构区域对应的常用内参蛋白
| 应用背景 | 推荐内参 | 分子量 | 推荐货号（Proteintech） |
|---|---|---|---|
| 细胞总裂解液 | GAPDH、β-Actin、α/β-Tubulin | 36 kDa、42 kDa、50–55 kDa | HY030014、HX034013、HX098013 |
| 细胞骨架相关 | Vinculin、Lamin A/C | 117 kDa、65–75 kDa | — |
| 核组分检测 | TBP、PCNA、Histone-H3、YY1 | 33–43 kDa、36 kDa、15–17 kDa、65–70 kDa | HB847014、HY337015、HV603014 |
| 线粒体成分 | ATP1A1、VDAC1、COX4I1、COX4I2 | 97–110 kDa、31–37 kDa、17–20 kDa | HY455014、HB031014、HY500014、HP949014 |
| 细胞增殖标志物 | BrdU | — | YP169013 |
| 血清/分泌系统 | Albumin、Transferrin | 66 kDa、77 kDa | BY411045、HY221014 |
Fig.2.细胞结构与内参适配关系图
| 中文名称 | 英文缩写 | 分子量范围 | 推荐用途说明 |
|---|---|---|---|
| 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 | GAPDH | 36 kDa | 胞质内参常用，受代谢调控影响大 |
| β-肌动蛋白 | β-Actin | 42 kDa | 广泛使用，肌肉组织中不稳定 |
| α/β-微管蛋白 | α/β-Tubulin | 50–55 kDa | 骨架研究与细胞周期相关实验 |
| 核组蛋白H3 | Histone-H3 | 15–17 kDa | 核定位明确，适用于染色质检测 |
| TATA结合蛋白 | TBP | 33–43 kDa | 跨组织、跨物种适用的核内参 |
| YY1转录因子 | YY1 | 65–70 kDa | 调控类实验中较理想的内参 |
| 线粒体电压通道蛋白 | VDAC1 | 31–37 kDa | 线粒体内参，部分死亡模型中不推荐 |
| 白蛋白 | Albumin | 66 kDa | 血清样本中最常用的参照蛋白 |
| 转铁蛋白 | Transferrin | 77 kDa | 分泌类蛋白的归一化标准 |
Q1. 内参抗体属于阴性对照还是阳性对照？
A：都不是。内参是内源性恒定表达的标准蛋白，用于信号归一化，不作为判断目标表达的指标。
Q2. GAPDH和β-actin可以作为所有实验的通用内参吗？
A：不建议。其表达容易受到处理干预影响，在代谢研究、药物处理或肿瘤模型中需谨慎使用或更换。
Q3. Western条带多、背景高是抗体问题吗？
A：不完全是。也可能由抗体浓度、样本降解、转膜不均等实验条件引起，建议优化实验方案和查阅产品说明。
Fig.3.实验条件变化下不建议选用的内参示意
一支可靠的内参抗体，不仅提升实验的可比性和分析精度，也是严谨科研背后的数据保障。科学选择内参，需要考虑目标蛋白、实验背景、处理条件及样本类型等多方面因素。abinScience持续提供经过验证的内参抗体产品，覆盖细胞不同结构分区，支持Preservative-free与定制分装需求，欢迎咨询我们的技术团队获取最适配的解决方案。
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