【流式研习社 8】流式细胞术基础术语解析：快速理解与应用

发布日期: 2026-01-12 访问次数: 475

流式细胞术作为一种重要的细胞分析工具，在生物学研究中发挥着不可或缺的作用。然而，对于刚接触这项技术的研究人员来说，流式细胞术中涉及的术语和概念可能会让人感到困惑。本文将重点介绍一些常见的流式细胞术术语，帮助你快速掌握核心概念，提升实验操作和数据分析的准确性。

一、仪器设置篇

1. FSC/SSC：流式细胞仪检测最基础的参数，用于反映细胞的天然物理形态特征。

FSC（前向散射光）：反映细胞的大小，信号强度与细胞体积相关。

SSC（侧向散射光）：反映细胞内部复杂度（如颗粒、细胞器、核形的复杂程度等），信号强度与细胞内部结构的复杂性成正比。

图1：FSC/SSC 细胞物理特征检测

2. 阈值：针对特定检测参数（如FSC或荧光通道）设定的信号强度最低标准。仪器将仅采集并分析信号强度超过此标准的事件，从而有效排除背景噪音及非目标颗粒的干扰，确保后续分析的准确性与可靠性。

图2：流式细胞仪不同阈值设置

3. 通道电压：流式细胞仪上控制检测器信号强度的关键参数。通道电压决定了流式细胞仪对荧光信号的灵敏度，如下图所示，电压设置过低（200 mV），信号可能会太弱，甚至无法区分未被荧光标记和被荧光标记的信号；电压设置过高（600 mV），信号可能会超出了仪器的检测范围，导致无法准确测量（即：流式分析时常说的压线，就是信号超出检测范围）。

图3：通道电压对荧光信号检测的影响

4. A/H/W：

流式细胞仪检测信号时，每一个细胞通过激光，仪器都会检测到一个光信号，由PMT（光电倍增管）放大将光信号转换成电脉冲信号，从细胞进入检测点，到细胞离开检测点，电脉冲信号由0到达峰值，再降为0，被记录成一个峰值：

✦ H (height)：电脉冲信号的高度，代表脉冲信号的峰值；

✦ W (width)：电脉冲信号的宽度，指细胞通过激光检测区域的时间；

✦ A (area)：电脉冲信号的面积，是通过W和H的数值计算出来。

A、H、W信号的用途：

去除黏连体：通常会选择这三个信号中的两个（如FSC-A/H，FSC-A/W），在分析数据时去除黏连体，排除干扰，黏连的细胞通过检测区域的时间更长，脉冲面积也更大。

图4：A/H/W 电脉冲信号

二、数据分析篇

1. 参数图：展示流式实验结果的不同方式，包括单参数图、双参数图、直方图等。

图5：流式实验常见参数图类型

2. 圈门 (Gating)：流式细胞术中用来选择或标记特定细胞群体的方法。在一堆细胞中圈出想分析的细胞，排除不相关的细胞。通过调整这个“圈”，可以精准地分析目标细胞的特征。

图6：流式数据分析不同圈门（Gating）

3. 去除黏连体：粘连体，是指两个或更多个细胞粘在一起（大多数是两个）的现象。黏连体会影响实验数据的准确性，因此我们需要在分析数据的时候将其排除掉。一般是通过A/H/W三个中的两个来排除，如FSC-A/H。

图7：去除黏连体

4. 补偿：不同荧光染料的发射光波长范围会有重叠，流式细胞仪收集的荧光信号是某一个波长范围内的（如：FITC通道收集的是515-535 nm之间的信号），这样就不可避免的会收集多个荧光的信号，补偿就是在数据分析时校正荧光染料光谱重叠，从多个信号中筛选出目标信号，排除其他干扰信号，从而获得准确多色流式数据的过程。

图8：荧光信号补偿校正原理

三、其他关键术语

1. Fc受体封闭剂：Fc受体封闭剂用于防止抗体与细胞表面的Fc受体结合，避免非特异性染色。Fc受体封闭剂能有效减少因Fc受体作用引起的背景染色，确保实验结果的准确性。

图9：Fc受体封闭剂作用对比结果

2. 固定破膜/固定透化：固定破膜/固定透化是流式细胞术中对细胞进行处理的常用方法，目的是通过固定细胞结构并使细胞膜透化，便于染色。固定通常用于保存细胞的表面标志物，而透化处理则使细胞膜变得透化，便于染色胞内抗原。要注意有两种固定破膜剂，一种作用温和一些，针对细胞因子这些细胞质中的指标，一种作用剧烈一些，针对转录因子这些在细胞核中的指标。

图10：不同Marker在细胞上表达位置

3. Negative/dim/low/moderate/high/bright/positive/variable：荧光强度的 “分级标准”。用于描述细胞荧光信号的强弱：Negative（阴性，无信号）、dim（弱信号）、low（低强度）、moderate（中等强度）、high（高强度）、bright（强信号）、positive（阳性，有信号），也常用 -/+/++/+++ 表示，帮助研究者精准区分不同信号强度的细胞群体。